基因体外扩增技术（PCR）在临床检验中的应用

自1985年，Kary Mullis发明了基因体外扩增技术（PCR）技术后，基因体外扩增技术得到了快速的发展和应用，新的PCR技术不断出现，RT-PCR、实时荧光PCR、巢式PCR等数十种PCR技术的出现推动基因体外扩增技术不断向前发展，是当今生物研究领域的重要的基础技术。同时PCR具有高特异性、简便快捷、高敏感性等优秀特征，在常见传染病、慢性病、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高的实际应用价值。

PCR技术发明后，很快在临床检验中得到应用，范围不断拓展，现在不仅应用于检测有遗传物质病原微生物，对病原体在生物体内的量（如病毒载量）进行测定，而且可以对人体的某些基因进行分型，对人体的染色体进行分析，这极大地提高了临床医生对遗传性疾病的诊断，那么PCR在医学检验中具体有什么用处呢？

病原微生物的定性，PCR在医学检验中的用处非常广泛，但最基本的用处是对病原微生物的定性，比如说病人感染了某种病原微生物，就可以通过PCR的方法进行定性检测。

PCR技术的最新进展：目前PCR技术飞速发展，派生出很多新的技术，比如核酸分子杂交技术，基因多态性分析技术，限制性酶切片段多态性(RFLP)分析技术，微卫星DNA分析技术，单核苷酸多态性分析(SNP)技术，单链构象多态性分析(SSCP)技术，DNA测序技术，DNA芯片技术，蛋白质组及分析技术，荧光原位杂交染色体分析技术（FISH），同时，PCR技术也可以和其他技术相结合，极大地拓展了分子生物学技术的应用。

21世纪是生命科学的世纪，分子生物学技术为人类探索生命奥秘提供了强有力的工具，大量新理论、新技术不断涌现，推动分子生物学蓬勃发展。目前由于一些新技术本身还不成熟、方法相对复杂、操作成本相对较高，限制了其在临床检验的常规应用，主要是下面几个：1、技术要求高：主要针对的是操作和设备要求，PCR实验室对设备和实验室的要求要符合有关规定，实验设备要专用，实验室要符合二级生物安全实验室的要求甚至更高。对实验人员的理论和实验操作技术要求较高，因为在实验过程中，很小的失误或操作误差都能对实验结果造成影响甚至实验失败。2、假阴性：在PCR实验过程中，最易产生的失误就是假阴性，检测标本中存在被检测的核酸，但实验结果却是阴性，造成假阴性的结果。造成假阴性结果的原因很多，主要是：核酸提取失败；试剂失效；人员操作误差；PCR引物设计不合理；仪器故障；扩增温度不合要求等等。3、假阳性：造成假阳性只有一个原因：污染，即被检测核酸污染了需要检测的标本。污染分为实验室污染和操作人员的手套污染。实验室污染是以前扩增产生的PCR产物（核酸片段）以气溶胶状态漂浮在实验室的空气中或吸附在实验设备上，在以后的实验中进入PCR的反应液中，扩增后产生了阳性结果，该结果为假阳性结果。假阳性扩增的是污染的核酸片段，而非被检测标本中的核酸。